1. 色譜柱的使用說明：
   （1）色譜柱使用前注意事項(xiàng)：

   色譜柱的儲(chǔ)存液無特殊說明，均為評(píng)價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。

   （2）流動(dòng)相：

   流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。

   以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0，BDS C18適合于堿性化合物，PH值適用范圍為2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動(dòng)相。

   （3）樣品：

   樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。 

   2、色譜柱的保存  

   （1）反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：

   使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

   （2）長期保存色譜柱：

   如色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑*或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度是室溫。 

   3、色譜柱的再生  

   因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。

   （1）反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

   （2）正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。 

   4、色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法  

   色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢增加，屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點(diǎn)：

   （1）色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；

   （2）色譜柱頭的填料被樣品污染；

   （3）色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；

   （4）流動(dòng)相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。

   解決辦法如下：

   （1）如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10％的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。

   （2）如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。

   （3）如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。

   （4）如果因PH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
   一、色譜柱的使用
   反相色譜柱一般是保存在甲醇或乙腈中。使用前一定注意所使用的流動(dòng)相和甲醇或乙腈能夠互溶。色譜柱在保存過程中有可能因?yàn)槿軇┑膿]發(fā)而干涸，所以在使用流動(dòng)相分析之前應(yīng)使用10—20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱。如果所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則應(yīng)注意用水作為過渡，而不能直接將有機(jī)溶劑和緩沖鹽直接混合。測(cè)試結(jié)束后沖洗柱子也要注意這一點(diǎn)。還有一點(diǎn)需要注意的是不要使用純水沖洗色譜柱。對(duì)于非極性柱，比如C8和C18，由于純水不能浸潤填料表面而沖倒碳鏈，造成柱效下降。另外，分析樣品時(shí)由于純水不能浸潤填料表面形成水膜，出現(xiàn)樣品不保留而使分離度下降，重復(fù)性差，所以對(duì)于一般的C8和C18柱，有機(jī)溶劑的比例不應(yīng)低于5%。
   二、色譜柱的再生
   再生過程中用來沖洗色譜柱的溶劑體積可以參照下表： 

再生過程及溶劑沖洗順序可參見下表：

三、色譜柱的維護(hù)
1.盡量能夠使用預(yù)柱或保護(hù)柱保護(hù)色譜柱；
2.大多數(shù)色譜柱的PH范圍是2—8，盡量不要超過范圍使用；
3.避免流動(dòng)相的組成或比例急劇變化；
4.流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行過濾和脫氣處理；
5.如果使用極性或粒子性的緩沖液作流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)將色譜柱沖洗干凈
C18柱子清洗再生 
用下列10倍柱體積的溶劑清洗：（正向沖洗時(shí)流速：0.5ml/min） 
95%水：5%乙腈(或甲醇) 
（去除緩沖鹽） 
如系統(tǒng)沒有梯度功能中間增加5倍柱體積50%水：50%乙腈（或甲醇）沖洗步驟。 
95% 乙腈（或甲醇）：5%水 
zui后保存在35%水：65%乙腈中（或甲醇）。 
如是Phenomenex柱子可以反沖，但流速一點(diǎn)要控制在0.2ml/min之內(nèi)。 
如還有疑問，可以發(fā)郵件給我，ydfq-0013

你問的不是C18的沖洗嗎？那個(gè)二氯甲烷是沖洗正相硅膠柱的，也就是（silica柱子的）。
一、反相柱子的再生
順次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），已腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
液相色譜HPLC保留時(shí)間漂移的故障排除 
保留時(shí)間不重現(xiàn)有兩種不同的情況：即保留時(shí)間漂移和保留時(shí)間波動(dòng)。前者是指保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保留時(shí)間無固定規(guī)律的波動(dòng)。將此兩種情況區(qū)分開來對(duì)找到問題的原因往往很有幫助。保留時(shí)間漂移的幾種zui常見的原因如下:
一 色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時(shí)間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相*平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的流動(dòng)相，但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑（如離子對(duì)試劑）則需要相當(dāng)長的時(shí)間來平衡色譜柱。
流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移。應(yīng)注意：水是很容易污染的流動(dòng)相成分。
二 固定相穩(wěn)定性
固定相的穩(wěn)定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內(nèi)使用，固定相也會(huì)慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩(wěn)定性。水解速度與流動(dòng)相類型和配體有關(guān)。雙官能團(tuán)配體和三官能團(tuán)配體比單官能團(tuán)配體的鍵合相要穩(wěn)定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩(wěn)定的多。
經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì)加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。
三 色譜柱污染
保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過實(shí)驗(yàn)可判斷污染的來源。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類脂類化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì)有反壓的增加。可以通過使用固相提?。⊿PE）等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。
避免色譜柱污染zui簡單的方法是防患于未然。相比之下，找到問題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。
使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。
四 流動(dòng)相組成
流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。
五 疏水坍塌
當(dāng)小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或*不保留的現(xiàn)象，這就是疏水坍塌。此現(xiàn)象是由流動(dòng)相不浸潤固定相表面而致。挽救的辦法實(shí)現(xiàn)用含大量有機(jī)組分的流動(dòng)相浸潤固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。由是色譜柱長期儲(chǔ)存也會(huì)發(fā)生此現(xiàn)象。使用內(nèi)嵌極性基團(tuán)的反相色譜柱或非端基封口的色譜柱也可避免發(fā)生坍塌